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    elisa試劑盒檢測(cè)中顯色液A和B有什么作用

    發(fā)布時(shí)間: 2021-07-21  點(diǎn)擊次數(shù): 1019次
       酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enayme liked immunosorbent,ELISA)是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種檢測(cè)技術(shù),因其具有敏感性高 特異性強(qiáng) 操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的測(cè)定,為輔助臨床診斷與生物科研起到了積極的作用.
      elisa試劑盒檢測(cè)中顯色液A和B有什么作用
      酶聯(lián)免疫診斷試劑盒的底物A就是顯色劑A(含過氧化氫)為供氫體(DH2),底物B就是顯色劑B(含TMB),用于顯色.另外,常用的底物還有:
      AP的底物,常用的為對(duì)-硝基苯磷酸脂(PNP),其反應(yīng)物為黃色的對(duì)硝基酚,測(cè)讀波長(zhǎng)為405nm2)GOD的底物,為葡萄糖,供氫體為對(duì)硝基藍(lán)四氮唑,反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的藍(lán)色沉淀什么是TMB?TMB即四甲基聯(lián)苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine)是一種脂溶性較強(qiáng)的基團(tuán),因此容易進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞器中的HRP反應(yīng),且由于這種高度的脂溶性,使其易形成多聚體,在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的 深蘭色沉淀物,這使得TMB成為組化實(shí)驗(yàn)中的一種很好的發(fā)色團(tuán).同時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反應(yīng)進(jìn)行.
      TMB的反應(yīng)產(chǎn)物為深藍(lán)色,利于光鏡觀察,且反應(yīng)產(chǎn)物越聚越大,常超出單個(gè)細(xì)胞器的范圍(而DAB則被限制在其內(nèi)),故TMB反應(yīng)的檢測(cè)閾較低.
      由于上述優(yōu)點(diǎn),目前TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究.需要注意的是:TMB顯色液中的A液和B液應(yīng)在2h內(nèi)新鮮配制.另外,TMB是一種較強(qiáng)的皮膚刺激劑,并有致癌的潛在可能,故使用時(shí)應(yīng)帶手套及在通風(fēng)條件下操作...酶聯(lián)免疫診斷試劑盒的底物A就是顯色劑A(含過氧化氫)為供氫體(DH2),底物B就是顯色劑B(含TMB),用于顯色.另外,常用的底物還有:1)AP的底物,常用的為對(duì)-硝基苯磷酸脂(PNP),其反應(yīng)物為黃色的對(duì)硝基酚,測(cè)讀波長(zhǎng)為405nm2)GOD的底物,為葡萄糖,供氫體為對(duì)硝基藍(lán)四氮唑,反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的藍(lán)色沉淀,什么是TMB?TMB即四甲基聯(lián)苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine)是一種脂溶性較強(qiáng)的基團(tuán),因此容易進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞器中的HRP反應(yīng),且由于這種高度的脂溶性,使其易形成多聚體,在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的 深蘭色沉淀物,這使得TMB成為組化實(shí)驗(yàn)中的一種很好的發(fā)色團(tuán).同時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反應(yīng)進(jìn)行.TMB的反應(yīng)產(chǎn)物為深藍(lán)色,利于光鏡觀察,且反應(yīng)產(chǎn)物越聚越大,常超出單個(gè)細(xì)胞器的范圍(而DAB則被限制在其內(nèi)),故TMB反應(yīng)的檢測(cè)閾較低.由于上述優(yōu)點(diǎn),目前TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究.需要注意的是:TMB顯色液中的A液和B液應(yīng)在2h內(nèi)新鮮配制.另外,TMB是一種較強(qiáng)的皮膚刺激劑,并有致癌的潛在可能,故使用時(shí)應(yīng)帶手套及在通風(fēng)條件下操作.TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色,目視對(duì)比鮮明.TMB性質(zhì)較穩(wěn)定,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液,可直接作底物使用.另外,TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn),因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛.酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后,TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色,可在比色計(jì)中定量,zui適吸收波長(zhǎng)為405nm.ABTS雖不如OPD和TMB敏感,但空白值極低,也為一些試劑盒所采用.
      南京卡米洛生物的elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單 快速 靈敏度高 特異性強(qiáng) 性價(jià)比高 樣品所需量少
      1.操作簡(jiǎn)單 快速.所有操作步驟,都有圖譜示意,讓你簡(jiǎn)單明了,不必為研究操作步驟而耽擱時(shí)間.
      2.靈敏度高. 酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象.我們的試劑盒實(shí)現(xiàn)了在ug ng pg水平上對(duì)其進(jìn)行定量.
      3.特異性強(qiáng).特異性來自抗體或抗原的選擇性.采用國(guó)際抗體抗原,保證的試劑盒品質(zhì).
      4.性價(jià)比高,質(zhì)量穩(wěn)定.
      5.樣品所需量少.
      以上知識(shí)僅供參考希望對(duì)您有所幫助哦。