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探討血清進(jìn)行熱滅活的原因
發(fā)布時間： 2023-02-16 點(diǎn)擊次數(shù)： 777次血清一般具有促進(jìn)細(xì)胞生長代謝、提供各種生長因子、保護(hù)培養(yǎng)中的細(xì)胞等作用。血清提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素等，可以促進(jìn)細(xì)胞生長代謝。提供各種生長因子以及激素，如血小板生長因子、雌二醇等。提供伸展因子及促接觸因子，就可以保護(hù)細(xì)胞貼壁，減少機(jī)械損傷。提供結(jié)合蛋白，可攜帶低分子物質(zhì)，如鐵、激素等，維持細(xì)胞代謝。血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長達(dá)30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實(shí)驗室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，多數(shù)實(shí)驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響，在我們的技術(shù)專線中常被提到的就是否該對血清進(jìn)行熱滅活，下面我們就對胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。根據(jù)調(diào)查，至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等.其中*chang用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。有科研人員曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外，多數(shù)實(shí)驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。在對補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時，血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題，HyClone使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù)，自從采用這項技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化，有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實(shí)驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。
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