發(fā)布時(shí)間: 2020-05-14 點(diǎn)擊次數(shù): 1165次
ELISA試劑盒得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。在采集樣品之前必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,清楚要測(cè)試的成分是否足夠穩(wěn)定。同一回采集的ELISA樣本被及時(shí)存放在4℃。對(duì)于第二天測(cè)試的樣本,樣品應(yīng)在加載后的-20℃及時(shí)冷凍。如果有條件,將它們冷凍到-70℃。標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。液體標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸水和腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。
1、血清
室溫自然凝固10-20分鐘后,將血液離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集清洗。如果保存過程中出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、等離子體
應(yīng)根據(jù)樣品的要求選用EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑?;旌?0-20分鐘后,離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3、尿液
用無菌管收集,離心約20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集清洗。如果保存過程中有沉淀形成,應(yīng)再次離心。根據(jù)這一做法,以胸水、胸水和腦脊液(腦脊液)為參考。
4、細(xì)胞培養(yǎng)上清
檢測(cè)分泌成分時(shí),用無菌管收集,離心20分鐘(每分鐘2000-3000轉(zhuǎn)),仔細(xì)收集。
5、培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)組分時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度約為100萬/ml。通過反復(fù)凍融或添加組織蛋白提取劑,細(xì)胞被破壞,細(xì)胞內(nèi)成分釋放。離心20分鐘(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集清洗。如果保存過程中有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6、組織標(biāo)本
切完標(biāo)本后,稱重。加入一定量的PBS,pH7.4。用液氮快速冷凍。試樣熔化后溫度保持在2-8℃。加入一定量的PBS(pH7.4)或組織蛋白提取劑,樣品用手或勻漿機(jī)均勻化。離心20分鐘左右(2000-3000 rpm)。仔細(xì)收集清洗。一份經(jīng)過單獨(dú)加載后將進(jìn)行測(cè)試,其余的將被冷凍并存放。(內(nèi)容僅供參考,如有問題或遇到問題請(qǐng)?jiān)诰€咨詢,我們會(huì)竭誠(chéng)為您服務(wù))