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ELISA試劑盒優(yōu)化加樣需要注意那些地方？
發(fā)布時間： 2020-06-16 點擊次數(shù)： 1070次ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA 、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化：在這一進(jìn)程中，一般情況下有三次加樣，它們分別是加標(biāo)本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上劇烈振動。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只需待血清天然凝集、縮短后即可獲得。也可在板孔中參與稀釋液，再在其參與血清標(biāo)本，然后在微型顫動器上顫動1分鐘以確保混和。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，跨過一星期測定的需低溫冰存。1、血清：用無菌管搜集，室溫血液自然凝固10-20分鐘，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如出現(xiàn)堆積，應(yīng)再次離心。2、尿液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。3、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)該再次離心。4、胸腹水：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。5、腦脊液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。6、唾液：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。7、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。8、牛奶：用無菌管搜集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），細(xì)心搜集上清，保存過程中如有堆積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項：1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但*有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。4、實驗時，要使底物避光保存。5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。10、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。13、檢測前，要打開酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。17、應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。?。▋?nèi)容僅供參考，如有問題或遇到問題可咨詢我們會竭誠為您服務(wù)）
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